O Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas, uma doença negligenciada e um problema de saúde pública especialmente nas Américas. Este protozoário é principalmente transmitido pelas fezes infectadas de insetos vetores pertencentes à subfamília Triatominae e, atualmente é subdividido em sete linhagens genéticas ou Unidades de Tipagem Discreta (DTUs), denominadas TcI - TcVI e TcBat. O presente trabalho teve por objetivo realizar um levantamento entomológico da fauna de triatomíneos, analisar os indicadores entomológicos e identificar as DTUs de T. cruzi dos triatomíneos provenientes de em comunidades rurais dos municípios de Bela Vista do Piauí, Campinas do Piauí, Colônia do Piauí, Isaías Coelho, Pedro II e São João da Varjota, Piauí, Brasil. No período de março a outubro de 2021, 16 comunidades rurais destes municípios foram visitadas e 275 unidades domiciliares (UD) foram investigadas. Após análise dos indicadores entomológicos, os tratos digestivos de espécimes adultos e ninfas de quarto e quinto estágio de desenvolvimento foram dissecados e molecularmente analisados por PCR para a presença de T. cruzi, as amostras positivas foram ainda submetidas a uma sequência de PCR convencional multilocus para determinação das DTUs de T. cruzi. A captura dos triatomíneos ocorreu em 15 das 16 comunidades trabalhadas, onde 77 UD foram positivas para a presença de triatomíneos. Foram coletados 925 triatomíneos, sendo 93,94% provenientes de ambientes peridomiciliares e 6,06% de intradomiciliares. Os insetos foram identificados como Triatoma brasiliensis (90,38%), T. pseudomaculata (9,19%), Rhodnius neglectus (0,32%) e Panstrongylus lutzi (0,11%), tendo sido as duas últimas capturadas apenas no intradomicílio. Os índices de infestação e colonização foram, respectivamente, 28 e 77,92%. A infecção natural foi observada em T. brasiliensis e R. neglectus, em 5.77% das amostras. Os espécimes analisados molecularmente apresentaram taxa de infecção por Trypanosoma sp. de 67,27%, infectando somente as espécies T. brasiliensis e T. pseudomaculata. Dentre as espécies positivas, 23,63% apresentaram com coinfecção por T. cruzi e T. rangeli. A genotipagem revelou TcV como o genótipo mais prevalente dentre as espécies de triatomíneos infectadas, neste estudo ainda identificamos a coinfecção por TcI/TcIV, TcIII/TcIV e TcIV/TcV em T. brasiliensis e TcI/TcV em T. pseudomaculata. O inquérito entomológico realizado nas comunidades rurais destes municípios e a presença de T. cruzi infectando triatomíneos nos ambientes peri e intradomiciliares evidencia o risco de transmissão da doença de Chagas sob o qual a população local está exposta e reforça a necessidade de ações contínuas de vigilância entomológica e de controle vetorial como forma de minimizar o risco de pessoas e animais contraírem a infecção.