Banca de QUALIFICAÇÃO: ARYANNY PAULA SOUSA FERREIRA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: ARYANNY PAULA SOUSA FERREIRA
DATA: 17/07/2020
HORA: 14:00
LOCAL: A defesa será realizada por meio de plataforma de comunicação remota.
TÍTULO: Estudo fisiológico e molecular em jurema-preta: superação de dormência em sementes e avaliação de genes ortólogos relacionados ao déficit hidríco
PALAVRAS-CHAVES: Expressão gênica, estiagem, RT-qPCR, semiárido
PÁGINAS: 84
GRANDE ÁREA: Ciências Biológicas
ÁREA: Genética
SUBÁREA: Genética Molecular e de Microorganismos
RESUMO:

As plantas superiores dominam os ecossistemas terrestres, no entanto, a seca, um importante fator ambiental vem limitando consideravelmente o desenvolvimento, produtividade e a distribuição de muitas cultivares de interesse econômico. Ao longo da evolução as plantas desenvolveram mecanismos naturais e moleculares que as permitem sobreviver mesmo em condições adversas, tais como a baixa disponibilidade hídrica. Mimosa tenuiflora (jurema-preta) é uma forrageira nativa pertencente à família Fabaceae com ampla distribuição na região semiárida do Nordeste brasileiro. Caracterizada por apresentar sementes com dormência tegumentar, é uma espécie naturalmente adaptada a altas temperaturas, podendo sobreviver a longos períodos de estiagem. Dessa maneira, o presente trabalho objetivou avaliar tratamentos pré-germinativos para superação da dormência, estabelecer um protocolo para extração de RNA total, bem como, padronizar ensaios de RT-qPCR (transcrição reversa do RNA codificante (RNAm) combinada à PCR quantitativa em tempo real) de genes ortólogos relacionados à tolerância ao estresse hídrico (DREB, HSP70 e LEA) e genes de referência (GAPDH, E-eF1A e β-Actina), além de sequenciar o genoma dos três genes responsivos à desidratação (DREB, HSP70 e LEA) a fim de identificar regiões conservadas nas sequências gênicas de jurema-preta. As avaliações dos tratamentos pré-germinativos mostrou que o ácido sulfùrico 98% é o método mais eficiente para a superação da dormência tegumentar. O protocolo modificado e otimizado a partir do Concert™ Plant RNA Reagent obteve rendimento de RNA, parâmetros de pureza e integridade superiores aos protocolos padrões avaliados. Os resultados das eficiências de amplificação dos genes de referência variaram de 92% a 99%. Os coeficientes de regressão linear (R²) foram superiores a 0,99 e a faixa dinâmica linear de 5log evidenciaram a robustez e precisão das reações. As curvas de melting e os controles de contaminação (NTC e –RTC) demonstraram a especificidade dos ensaios RT-qPCR. Entretanto, para os genes responsivos alvos ainda são necessários ensaios visando melhorar a eficiência de amplificação. O sequenciamento revelou que os genes alvos mantêm domínios conservados: AP2/ERF (DREB); WHy (LEA) e NBD_sugar-kinase_HSP70_actin (HSP). Os alinhamentos BLASTx da sequência proteica da HSP obteve 100% de identidade com todos os match hits gerados. A matriz de identidade do DREB mostrou de 60 a 65% de identidade com alguns acessos de cultivares de interesse econômico, enquanto que a LEA obteve de 22 a 27% de identidade. Entretanto, esse percentual pode ser maior, visto que há regiões em ambos os genes, fora do intervalo do amplicon, que não foram sequenciados. Ademais, estudos prospectivos mais avançados e contínuos, em M. tenuiflora e outras espécies nativas da região semiárida, podem fornecer informações adicionais, ou até mesmo revelar novas regiões codificadoras associadas ao mecanismo de tolerância à baixa disponibilidade hídrica.

MEMBROS DA BANCA:
Interno - 2058623 - JOSE EVANDO AGUIAR BESERRA JUNIOR
Externo à Instituição - LÚCIO FLAVO LOPES VASCONCELOS - EMBRAPA
Presidente - 068.464.242-53 - PAULO SARMANHO DA COSTA LIMA - EMBRAPA