A identificação de tecnologias que venham a reduzir os danos e melhorar as condições de criopreservação se torna relevante do ponto de vista biotecnológico, neste contexto surge o papel dos antioxidantes no diluidor de sêmen. Os danos peroxidativos induzem à formação de espécies reativas ao oxigênio (ROS), uma das principais causas da redução da viabilidade e da fertilidade dos espermatozoides. Diante deste contexto surge a necessidade de aperfeiçoar os processos de tecnologia de sêmen, principalmente quanto ao uso de diluentes, assim como avaliar as alterações espermáticas após a diluição e a criopreservação. Por conseguinte, o objetivo dessa pesquisa será avaliar os efeitos dos antioxidantes (ácido oleico, ácido palmítico e eugenol) na viabilidade de espermatozoides bovinos criopreservados. Foram coletados o sêmen de 4 touros, provenientes da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária – EMBRAPA Meio Norte, localizada na cidade de Campo Maior, Piauí, Brasil. Foram aferidas as características biométricas de desenvolvimento testicular dos animais como circunferência escrotal, comprimento e largura testicular, para o cálculo do volume testicular. As coletas de sêmen foram realizadas duas vezes por semana, por três semanas, totalizando 24 ejaculados, com o auxílio de um eletro estimulador controlado automaticamente (Biocon ® Soluções para Biotecnologia, Uberaba, Minas Gerais, 150 Brasil). O sêmen foi diluído em meio Tris-Gema de acordo com a concentração espermática e o ejaculado de cada animal foi dividido em sete tratamentos, controle (tris-gema), 50µM e 100 µM (ácido oleico); 50µM e 100 µM (ácido palmítico); 10µM e 50 µM (eugenol). Posteriormente o sêmen foi congelado em máquina TK 3000 em curva específica para a espécie, e posteriormente armazenado em botijão criogênico a -196ºC. Após a descongelação em banho maria a 37ºC por 30 segundos, foi avaliado a longevidade espermática através do teste de termorresistência (TTR), mensurando a motilidade e vigor espermáticos em 0, 60, 120 e 180 minutos pós-descongelação. O sêmen descongelado foi submetido ao teste de funcionalidade da membrana plasmática pelo HOST. Para análise estrutural dos espermatozoides foram utilizadas sondas fluorescentes, determinando a integridade de membrana plasmática, integridade acrossomal das células espermáticas. A análise morfológica dos defeitos espermáticos foi feita pela contagem de 200 células em preparação úmida, quantificando-se os defeitos de cabeça, defeitos de peça intermediária, defeitos de cauda, defeitos maiores e defeitos totais. Adotou-se O delineamento experimental foi em bloco ao acaso – DBC, com sete tratamentos, quatro animais e cinco medidas repetidas no tempo. No TTR, ocorreu maior porcentagem de motilidade e maior vigor na EC. O tratamento P100 apresentou menor motilidade e vigor espermático. Na análise estrutural observou-se maior integridade acrossomal no tratamento E10.