INTRODUÇÃO: A etiologia de defeitos de desenvolvimento de esmalte (DDE) na dentição decídua é multifatorial, porém a influência dos fatores genéticos e ambientais ainda não está elucidada. OBJETIVO: Determinar a concordância de DDE entre pares de gêmeos pré-escolares mono (MZ) e dizigóticos (DZ), a herdabilidade da condição e fatores associados. MATERIAIS E MÉTODOS: Trata-se de um estudo transversal, aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal do Piauí (parecer: 4.541.438). Após treinamento e calibração dos pesquisadores, um estudo-piloto será realizado com 60 pré-escolares não gêmeos de cinco anos, para adequação da metodologia. A população deste estudo será censitária e constituída de todos os pares de gêmeos na faixa etária de quatro a cinco anos matriculados em pré-escolas públicas e privadas de Teresina-PI, em 2023, estimada em 576 indivíduos. Serão excluídas crianças não colaborativas, com amelogênese imperfeita ou em uso de aparelho ortodôntico fixo. Questionários de avaliação de zigosidade, socioeconômico e de condições de saúde pré, peri e pós-natais serão aplicados aos responsáveis. Quatro examinadores previamente treinados e calibrados realizarão diagnóstico do desfecho utilizando o índice DDE modificado. A variável principal será dicotomizada em presença e ausência de DDE. A análise estatística descritiva e bivariada será realizada pelo software Stata versão 18.0. A diferença da concordância de DDE entre pares de gêmeos MZ e DZ será calculada pelos testes qui-quadrado de Pearson ou Exato de Fisher. A herdabilidade será estimada, de modo a verificar a magnitude da contribuição genética para a ocorrência da condição. Para determinar fatores associados, será realizada análise de regressão de Poisson bivariadas e multivariadas multinível, adotando-se três níveis (1º - dente; 2º - criança; 3º - par de gêmeos). O nível de significância considerado será de 5% (p<0,05) para todas as análises.