Os anestésicos tópicos são bastante utilizados na odontologia, principalmente para promover alívio no momento da punção da solução anestésica na mucosa oral. Entretanto, sua ação é limitada, já que não elimina completamente a sensação de dor no local de aplicação. A associação de anestésicos tópicos com sistemas nanoestruturados se mostra como uma alternativa na melhoria da atividade farmacológica da formulação tópica. Frente a isso, o objetivo do estudo foi desenvolver formulações nanoestruturadas de tetracaína e avaliar a atividade antinociceptiva de dor orofacial induzido por formalina em modelo animal. Foram realizados ensaios de caracterização físico-quimica (organolépticos, densidade relativa, determinação de tamanho). Como resultados experimentais, 02 formulações nanoestruturadas foram obtidas, sendo uma delas com adição de polímero mucoadesivo. Um método analítico foi validado com a seguinte equação da reta: y = 0,0933x + 0,0008 [y = absorbância (nm); x = concentração do fármaco (μg.mL-1)]. Todas as amostras foram analisadas em triplicata a 310 nm, por espectrofotometria no ultravioleta. As formulações desenvolvidas apresentaram atividade antinociceptiva quando avaliadas no modelo de dor orofacial induzida por formalina, e não apresentaram diferença estatística na atividade antinociceptiva comparadas a formulação utilizada na clínica odontológica. Entretanto, por apresentarem características mucoadesivas e ausência da fenilefrina, que pode aumentar o risco de doenças cardiovasculares, as formulações nanoestruturadas são potencialmente mais seguras quando utilizadas na mucosa oral. As formulações obtidas são promissoras, sendo uma alternativa para utilização na odontologia e apresentando-se como um sistema com grande potencial de utilização na anestesia de tecidos na mucosa oral.