Os produtos naturais vêm se tornando uma terapêutica alternativas de forte relevância no tratamento de doenças, onde os óleos essenciais extraídos de plantas têm sido estudados quanto aos seus potenciais, dentre eles, potencial antimicrobiano e antioxidante, tendo evidencias comprovadas em pesquisas. O óleo essencial de Croton heliotropiifolius Kunth (OECH) (Velame ou marmeleiro), extraído das folhas, é amplamente empregado na medicina popular devido às suas propriedades anti-séptica, analgésica, sedativa, anti-inflamatória, espasmolítica, anestésica local e larvicida contra o Aedes aegypti. O objetivo deste estudo foi avaliar o rendimento e a composição química do OECH extraído de folhas frescas, sob condições locais predominantes, bem como avaliar sua atividade antibacteriana em ensaios in vitro. O rendimento de óleo extraído de 600 g de material vegetal em aparelho Clevenger foi de de 0,68 ± 0,08 %. Foi feita análise química por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM) e determinada a atividade antibacteriana desse óleo. Os ensaios antibacterianos foram realizados pelo método de determinação da concentração inibitória mínima (CIM). Os principais constituintes do óleo essencial do estudo são o α-pineno (16,70%), 1,8-cineol (eucaliptol) (13,81%), biciclogermacreno (9,44%) e transcariofileno (6,46%). A atividade antibacteriana apresentou uma concentração inibitória mínima (CIM) maior que 200 µg/mL). A escolha dessas concentrações baseou-se em testes prévios de citotoxicidade para garantir a segurança. Portanto, futuros estudos devem considerar testar concentrações mais elevadas e explorar a influência de diferentes condições ambientais na composição e atividade biológica do óleo essencial. A microrregião do litoral piauiense possui um potencial inexplorado para a bioprospecção de plantas nativas, oferecendo uma rica fonte de compostos bioativos. A compreensão da variabilidade sazonal e das propriedades biológicas do óleo essencial dessa espécie pode levar ao desenvolvimento de novos produtos biotecnológicos, além de contribuir para a conservação da biodiversidade local.